酿酒酵母EBY100菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

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菌种保藏由于影响因素过多,细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决,因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。

1. 酿酒酵母EBY100菌种培养试剂的保存:

血清-5oC - -20oC 保存,避免反复冻融。

培养基: 2oC – 8oC避光保存。

完全培养基: 2oC – 8oC避光保存,并在2周内用完。

尽量缩短血清和培养基见光的时间

2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法:

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20◦C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。酿酒酵母EBY100菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定,降解比较慢,提高细胞的存活和生长,极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红:

酿酒酵母EBY100菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类***的作用,特别是雌***。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC793HCEpiC人角膜上皮细胞DMEM贴壁

EC471GIST-48人胃肠道间质瘤细胞McCoy’s 5a贴壁

EC794NPA87人甲状腺乳头状癌细胞F12K/DMEM贴壁

EC795SW837人结直肠腺癌上皮细胞L15贴壁

EC817SW1463人直肠腺癌细胞L15贴壁

EC796 Walker/LLC-WRC256大鼠腹水癌细胞大鼠DMEM贴壁

EC797SRA01/04 永生化人晶状体上皮细胞DMEM贴壁

EC799HPAEpiC人肺泡上皮细胞DMEM贴壁

EC798MLMEC小鼠微血管内皮细胞小鼠DMEM贴壁

EC800HOP-62人非小细胞肺癌细胞1640贴壁

EC818HRGEC人肾小球内皮细胞DMEM贴壁

EC819MAEC小鼠主动脉内皮细胞小鼠DMEM贴壁

EC820MGECs小鼠肾小球内皮细胞小鼠DMEM贴壁

EC821NCI-H660人小细胞肺癌细胞1640贴壁

EC822Human podocyte人肾足细胞McCoy’s 5a贴壁

EC823ATDC5小鼠胚胎瘤细胞小鼠DMEM贴壁

EC824DB人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞1640悬浮

EC830SU-DHL-2人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞1640悬浮

EC825KOPN-8人前B淋巴瘤细胞IMDM悬浮

EC826MOPC小鼠少突胶质前体细胞小鼠EMEM贴壁

EC831SIRC兔角膜上皮细胞DMEM贴壁

EC827FL62891人肝细胞1640贴壁

EC828AZ521人胃癌细胞1640贴壁

EC829MTEC1小鼠胸腺上皮细胞小鼠1640贴壁

EC8321301人淋巴细胞1640悬浮

EC833SUP-T1人T淋巴母细胞瘤细胞1640悬浮

EC834IMR-90人胚肺成纤维细胞DMEM贴壁

EC841MX-1人乳腺癌细胞1640贴壁