大肠杆菌JM110菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

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菌种保藏由于影响因素过多,细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决,因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。

1. 大肠杆菌JM110菌种培养试剂的保存:

血清-5oC - -20oC 保存,避免反复冻融。

培养基: 2oC – 8oC避光保存。

完全培养基: 2oC – 8oC避光保存,并在2周内用完。

尽量缩短血清和培养基见光的时间

2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法:

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20◦C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌JM110菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定,降解比较慢,提高细胞的存活和生长,极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红:

大肠杆菌JM110菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类***的作用,特别是雌***。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC970TF-1人白血病细胞1640悬浮

EC971AEC16人心肌细胞DMEM贴壁

EC972PEC-3M-2B4 人低转移前列腺癌细胞1640贴壁

EC973HLEpiEC人晶状体上皮细胞DMEM贴壁

EC974EC26小鼠结肠癌细胞小鼠1640贴壁

EC975EBEC-1人肺鳞癌细胞1640贴壁

EC976EEC109人食管癌细胞DMEM贴壁

EC97716HBE人支气管上皮样细胞DMEM贴壁

EC978ECLL 人慢性淋巴细胞白血病细胞1640悬浮

EC979BEP2D人永生化支气管上皮细胞DMEM贴壁

EC980M1人急性白血病细胞1640悬浮

EC981MDA231-LM2 人高转移性乳腺癌细胞L15贴壁

EC982HIT-T15仓鼠beta胰岛细胞仓鼠DMEM贴壁

EC983MPVEECs小鼠肺微血管内皮细胞小鼠DMEM贴壁

EC984NG108-15小鼠神经瘤细胞小鼠EMEM贴壁

EC985HTSMEC人气管平滑肌细胞DMEM贴壁

EC986BERH-2大鼠肝癌细胞大鼠DMEM贴壁

EC987LMH鸡肝细胞DMEM贴壁

EC988SNK1人NK/T细胞淋巴瘤细胞1640悬浮

EC989ECBRH7919 大鼠肝癌细胞大鼠DMEM贴壁

EC990D341Med人髓母细胞瘤细胞1640悬浮

EC991SNK8人NK/T细胞淋巴瘤细胞1640悬浮

EC992TOV-21G人卵巢癌细胞1640贴壁

EC993F9小鼠畸胎瘤细胞小鼠EMEM贴壁

EC994IBRS-2 猪肾细胞DMEM贴壁

EC995U-ECH1人脊索瘤细胞EMEM贴壁

EC996IEEC-18大鼠回肠细胞大鼠MECECoy’s 5a贴壁

EC997mREEC小鼠视网膜内皮细胞小鼠DMEM贴壁