大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)plysS菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

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菌种保藏由于影响因素过多,细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决,因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。

1. 大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)plysS菌种培养试剂的保存:

血清-5oC - -20oC 保存,避免反复冻融。

培养基: 2oC – 8oC避光保存。

完全培养基: 2oC – 8oC避光保存,并在2周内用完。

尽量缩短血清和培养基见光的时间

2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法:

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20◦C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)plysS菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定,降解比较慢,提高细胞的存活和生长,极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红:

大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)plysS菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类***的作用,特别是雌***。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC168RBE人肝胆管癌细胞

EC169SK-HEP-1人肝癌细胞1640贴壁

EC17095D人肺巨细胞癌细胞(高转移)1640贴壁

EC171NCI-H1650人非小细胞肺癌细胞

EC172NCI-H1975人肺腺癌细胞DMEM贴壁

EC173NCI-H358人非小细胞肺癌细胞

EC174NCI-H460 [H460]人大细胞肺癌细胞1640贴壁

EC175NCI-H661人大细胞肺癌细胞

EC176SK-MES-1人肺鳞癌细胞1640贴壁

EC177A549人非小细胞肺癌细胞DMEM贴壁

EC178Calu-1人肺癌细胞

EC179Calu-3人肺腺癌 (胸水)IMDM贴壁

EC180Calu-6人退行性癌细胞

EC181HCC827人非小细胞肺癌细胞

EC182MSTO-211H人肺癌细胞株

EC183NCI-H1299人非小细胞肺癌细胞

EC184NCI-H1395人肺腺癌细胞

EC185NCI-H2452 [H2452]人间皮瘤细胞

EC186KB人口腔表皮样癌细胞DMEM贴壁

EC187A-673 人横纹肌瘤细胞

EC188HT1080人纤维肉瘤DMEM贴壁

EC189A172人胶质母细胞瘤细胞DMEM贴壁

EC190IMR-32人神经母细胞瘤细胞

EC191SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞DMEM贴壁

EC192SK-N-BE(2)人神经母细胞瘤细胞DMEM贴壁

EC193SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞DMEM贴壁

EC194U-118 MG人脑星形胶质母细胞瘤DMEM贴壁

EC195U251人胶质瘤细胞DMEM贴壁