大肠杆菌BL21-Trxb(DE3)菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

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菌种保藏由于影响因素过多,细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决,因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。

1. 大肠杆菌BL21-Trxb(DE3)菌种培养试剂的保存:

血清-5oC - -20oC 保存,避免反复冻融。

培养基: 2oC – 8oC避光保存。

完全培养基: 2oC – 8oC避光保存,并在2周内用完。

尽量缩短血清和培养基见光的时间

2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法:

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20◦C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌BL21-Trxb(DE3)菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定,降解比较慢,提高细胞的存活和生长,极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红:

大肠杆菌BL21-Trxb(DE3)菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类***的作用,特别是雌***。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。JMSU1

EC208HPBALL T细胞白血病细胞1640悬浮

MUTZ-1

RECHAECV

EC131BJAB 人B细胞淋巴瘤细胞1640悬浮

EC422GES-1?人胃粘膜细胞1640贴壁

EC430Toledo 人B淋巴细胞株瘤细胞IMDM悬浮

EC4319L 小鼠胶质瘤小鼠DMEM贴壁

EC432MLE-12 小鼠肺上皮细胞小鼠DMEM贴壁

EC436KBM5 人慢性髓白血病细胞细胞IMDM悬浮

EC453VSEC4.1 脊髓前角运动神经元瘤细胞系EMEM贴壁

EC437HIEC 人小肠癌细胞系1640贴壁

EC438LN-18 人神经胶质瘤细胞DMEM贴壁

EC439Kupffer 肝枯否细胞1640或DMDM贴壁

EC460SNU475 人肝癌细胞1640贴壁

EC1270T98G 人脑胶质细胞瘤细胞DMEM贴壁

EC0546HMEEC-1 人微血管内皮细胞株1640贴壁

EC0973NECTEC1469 小鼠正常肝细胞小鼠DMEM贴壁

EC0509HIEEC 正常人肠上皮细胞1640贴壁

EC0577HPDE6-EC7 人正常胰腺导管上皮细胞DMEM贴壁

EC1104RGEC-5 小鼠视网膜神经节细胞小鼠DMEM贴壁

EC0589hRMEECs 人视网膜微血管内皮细胞DMEM贴壁

EC898MN9D 小鼠中脑多巴胺能神经元细胞小鼠EMEM贴壁

EC440HECS-2/8 人软骨肉瘤细胞MECECoy’s 5a贴壁

EC1133RTE 大鼠气管上皮细胞大鼠DMEM贴壁

EC948NECI-H1993 人肺腺癌细胞1640贴壁

EC905MONOMAEC6 急性单核细胞白血病细胞1640悬浮

EC483SU-DHL-10 人类B细胞淋巴瘤细胞1640悬浮

EC485184A1 人乳腺上皮细胞1640贴壁

EC203ECECD 841 ECoN人正常结肠上皮细胞DMEM贴壁